Tunnskiktskromatografi är en kemisk analysmetod baserad på användningen av ett absorberande skikt med en tjocklek av 0,1-0,5 mm som en stationär fas. TLC-metoden kan användas inom olika områden och möjliggör bestämning av en mängd olika kemiska föreningar.
Metodprincip
Metoden för tunnskiktskromatografi föddes från papperskromatografi och de första experimenten utfördes på 80-talet på 1800-talet. Den aktiva användningen av denna analys började först efter 1938.
TLC-tekniken inkluderar en mobil fas (elueringsmedel), en stationär fas (sorbent) och en analyt. Den stationära fasen appliceras och fixeras på en speciell platta. Plattan kan vara gjord av glas, aluminium eller plast - dessa är återanvändbara underlag som måste tvättas noggrant, torkas och förberedas för applicering av sorbenten efter varje användning. Det är också möjligt att använda pappersplattor som kasseras efter användning.
Kiselgel används oftast som den stationära fasen, men det är möjligt att använda andra sorbenter, till exempel aluminiumoxid. Vid användning av ett eller annat sorbent måste tekniken följas strikt för att resultatet ska bli korrekt, till exempel eftersom silikagel kan ge ett felaktigt resultat om luften i laboratoriet är för fuktig.
Lösningsmedel används som den mobila fasen, till exempel vatten, ättiksyra, etanol, aceton, bensen. Valet av lösningsmedel måste tas på ett ansvarsfullt sätt, eftersom resultatet av kromatografi beror direkt på dess egenskaper (viskositet, densitet, renhet). Ett individuellt lösningsmedel väljs för varje analyserat prov.
Analys
Provet måste spädas i ett lösningsmedel. Om fullständig upplösning inte sker och för många orenheter kvarstår, kan provet rengöras genom extraktion.
Appliceringen av provet på plattan kan göras automatiskt eller manuellt. Automatisk applicering använder en mikrospraymetod där varje prov sprutas på lämpligt område av substratet. För manuell applicering används en mikropipett. Pennmärken placeras på plattan för varje prov. Varje prov appliceras med kapillär på plattan i en linje på tillräckligt avstånd från märkena för att inte reagera med kol från ledningen.
Plattan placeras i ett kärl, i vilket botten elueringsmedlet hälls. Stödet placeras med en kant in i kärlet upp till den markerade linjen. Fartyget är tätt stängt för att undvika avdunstning av den mobila fasen. Under inverkan av kapillärkrafter börjar elueringsmedlet att stiga upp i det sorberande skiktet. När elueringsmedlet når en viss nivå avlägsnas plattan från kärlet och torkas.
Om den önskade substansen inte har någon färg, kommer den inte att synas på underlaget. Därför utförs visualisering - bearbetning av plattan med jodånga eller andra färgämnen.
Efter sådan bearbetning utvärderas resultatet. Färgade områden med varierande intensitet visas på sorbenten. För att bestämma ett ämne (eller en grupp ämnen) jämförs de färgade områdena, deras storlek, intensitet och rörlighet med ett referensprov.
TLC-metoden används ofta eftersom den är snabb, billig, korrekt, intuitiv, inte kräver komplex utrustning och är lätt att tolka.
